Декрет установливал светский характер государственной власти, провозглашал свободу совести и вероисповедания и лишал религиозные организации прав юридического лица и собственности.
Церковь отреагировала на декрет крайне отрицательно. Поместный Собор издал постановление, в котором говорилось:
«Изданный Советом народных комиссаров декрет об отделении церкви от государства представляет собою под видом закона о свободе совести злостное покушение на весь строй жизни Православной Церкви и акт открытого против нее гонения... »
Декрет действительно стал основой для развертывания в стране широкой атеистической пропаганды, изъятия церковного имущества, захвата храмов и монастырей, десятки тысяч священников и церковнослужителей были репрессированы.
Лишь в октябре 1990 года декрет был отменен постановлением Верховного Совета РСФСР.